村上 明弘

ＳＣＣ抗原とcarbonyl reductase(ＣＲ)の機能解析１）ＳＣＣ抗原と結合する分子としてＣＲを発見した。２）癌の浸潤転移におけるＣＲの作用Ａ）ＣＲの発現低下は癌細胞の浸潤能および移動能を亢進させることが分かった。Ｂ）ＣＲの発現低下はＥ－カドヘリンの発現を低下させることが明らかとなった。Ｃ）ＣＲの低下が浸潤・移動能を亢進させる分子機構が明らか多なった。３）子宮頸部扁平上皮癌患者の組織のおけるＣＲの発現態度を検討した結果、ＣＲの発現が低下している症例では予後不良であった。

１．SCC抗原とcarbonyl reductase (CR)の機能解析<br>１）SCC抗原と結合する蛋白質としてCRを発見し、免疫沈降でも確認した。<br>２）CRの癌の浸潤・転移機構における役割の解明。<br>A)invasion assayによりCRの発現低下は癌細胞の浸潤能を亢進させることを明らかにした。<br>B）migration assayによりCRの発現低下は癌細胞の水平方向の運動能を更新させることを明らかにした。<br>C)CRの発現低下はE-カドヘリンの発現を低下させることを明らかにした。<br>D)上記の作用現象はCRの発現低下がCOX-2の発現上昇を誘導する結果によることを明らかにした。<br>３）現在、上記の現象を作用機序について検討中である。<br>４）子宮頸部扁平上皮癌患者におけるCRの発現態度と予後について免疫染色により検討中である。

1.ＳＣＣ抗原cDNAを扁平上皮癌細胞に遺伝子導入する。その細胞間の接着状態を顕微鏡下で観察する。反対に、ＳＣＣ抗原cDNAのアンチセンス遺伝子を導入し、同様に観察する。これらは、実験が既に終了しＳＣＣ抗原がＥ－カドヘリンの発現を調節し、細胞間接着の調節に関与していることが明らかとなっている。<br>２．扁平上皮癌細胞にアンチセンスＳＣＣ抗原cDNAを遺伝子導入し、細胞浸潤能やそれを調節するＭＭＰの発現を検討する。また、実際に癌患者の組織を用いてＳＣＣ抗原の発現と明らかとなっている接着因子の関係を検討する。現在、細胞の内外でＳＣＣ抗原の作用は異なり、細胞内での発現が低下すれば細胞間接着能を低下させ、浸潤能を亢進させる。一方、細胞外ではＳＣＣ抗原はＭＭＰ－９の発現を増加させ、細胞浸潤能が亢進することが明らかになっている。<br>３．ＳＣＣ抗原の融合蛋白を抽出し、これを用いた蛋白質間の結合分子を扁平上皮細胞内の分子から発見する。実際には、融合蛋白と結合する分子をＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびプロテオーム解析により同定する。現在この分子は同定されており、機能解析と臨床学的意義の検討中である。<br> <br>

１．SCCA ｃDNAを遺伝子導入した細胞を作製し、細胞間接着を形態的に観察する。それとともに、接着因子の発現をウエスタンブロットで検討する。反対に、SCCAのアンチセンスｃDNAを遺伝子導入し、同様に観察する。これらは、実験が終了し、SCCAが接着因子E-カドヘリンの発現を調節し、細胞間接着を調節していることを明らかにしている。<br>２．扁平上皮癌細胞にSCCAのアンチセンスｃDNAを遺伝子導入し、細胞浸潤能や浸潤の際に大きな役割を果たすMMPの発現を検討する。また、細胞外にSCCAを添加し細胞浸潤能やMMPの発現を検討する。細胞内外でのSCCAの働きは異なっており、細胞内では発現の低下が細胞接着能を低下させ、細胞の浸潤能を亢進させるが、細胞外のSCCAはMMP-9の発現を亢進させ、細胞浸潤能を促進させる役割があることを明らかにしている。<br>３．正常扁平上皮はカルシウムの濃度勾配があり、それに伴って細胞間の接着が強固になっている。SCCAの発現も免疫染色で同様の発現態度を示しており、カルシウムの濃度によるSCCAの発現をウエスタンブロットで検討中である。また、カルシウムによる細胞内SCCAの局在変化を蛍光顕微鏡かで観察を予定している。<br>４．SCCAの融合蛋白質を作製し、これを細胞破砕物と反応させ、結合する物質を電気泳動および質量分析により同定する。我々は、ある物質の同定とその局在を明らかにしている。

１．SCCA ｃDNAを遺伝子導入した細胞を作製し、細胞間接着を顕微鏡下で形態を観察するとともに、接着因子の発現を観察する。反対に、SCCA ｃDNAのアンチセンス遺伝子を導入して同様に観察する。これらは、実験が終了し、SCCAがE-カドヘリンの発現を調節し、細胞間接着の調節に関与していることを明らかにしている。<br>２．扁平上皮癌細胞にSCCA ｃDNAのアンチセンス遺伝子を導入して、細胞浸潤能やそれを調節するMMPの発現を検討する。同時に、細胞外にSCCAを添加し、細胞浸潤能MMPの発現を検討する。また、実際に癌患者の組織を用いてSCCAの発現と接着因子の関係を検討する。細胞内外におけるSCCAの作用は異なり、細胞内では発現の低下が細胞接着を低下させ、浸潤能を亢進させるが、細胞外ではMMP-9の発現を増加させ、細胞浸潤能を更新させていることが分かった。<br>３．SCCAの融合蛋白質を作製し、細胞破砕物と反応させ、結合する物質を電気泳動および質量分析器で検出する。見つかれば、この物質の細胞内局在およびその作用を検討する。

SCC抗原の発現を遺伝子導入によって調節し、細胞の接着状態、接着因子の発現状態、細胞外マトリックスへの接着状態について検討した。発現抑制により細胞間の接着状態の低下も確認した。この状態での、細胞の浸潤、細胞運動能およびMMPの発現に関して現在検討中である。