2021年4月 - 2025年3月
長鎖非コードRNA群によるCCN2を通じた骨格形成調節機構の解明
日本学術振興会 科学研究費助成事業 基盤研究(B) 基盤研究(B)
1. ACURの機能解析:ACURはCCN2 mRNAの3'非翻訳領域に相補的なアンチセンスRNAであり、その発現が予想に反してCCN2 mRNAの発現量と相関する。本年度は昨年度から取り組んでいる、GapmeRを用いたACUR特異的サイレンシング実験を繰り返し、ACURサイレンシングによりCCN2 mRNAの発現が有意に低下すること、さらに軟骨細胞分化のマスター転写因子であるSOX9の発現も同様に抑制されることを明らかにした。この効果はCCN2に対してより強くみられるため、ACURはCCN2の遺伝子発現促進を通じて軟骨細胞分化に貢献している可能性が高くなった。
2. ACURによるCCN2発現制御メカニズムの解析:ACURのCCN2制御機構を明らかにするため、CCN2 3'-UTRを蛍ルシフェラーゼ遺伝子下流に接続したレポーターベクターを軟骨細胞様HCS-2/8細胞に、ACUR強制発現ベクターとともに導入してルシフェラーゼ活性を評価したが、ACUR発現による変化はみられなかった。よってCCN2 3'-UTRを標的とするmiRNAなどのアクセスを遮断してCCN2発現を増強するという可能性は低くなった。そこで次にACURがCCN2遺伝子座周辺の微細環境の形成に貢献していることを想定し、予備実験を開始した。
3. UCA1の作用メカニズムの解明:昨年度の研究でUCA1の作用が軟骨細胞特異的であることが明らかになったが、本年度はヒト線維芽細胞にUCA1を強制発現させ、RNA-sequencingを行ったデータを公共データベースからダウンロードし再解析した。その結果、線維芽細胞でUCA1はCCN2発現に影響を与えないという結果が得られた。したがってUCA1によるCCN2発現制御は軟骨細胞形質の変化に伴う間接的な現象と考えられる。
4. CCN2遺伝子座から出力される新たなRNA分子の発見:CCN2 pre-mRNAから生成しうる環状RNA (circRNA)を探索したところ、ヒトとマウスにおいて今までに報告のないcircRNAが複数出力されていることを見出した。
2. ACURによるCCN2発現制御メカニズムの解析:ACURのCCN2制御機構を明らかにするため、CCN2 3'-UTRを蛍ルシフェラーゼ遺伝子下流に接続したレポーターベクターを軟骨細胞様HCS-2/8細胞に、ACUR強制発現ベクターとともに導入してルシフェラーゼ活性を評価したが、ACUR発現による変化はみられなかった。よってCCN2 3'-UTRを標的とするmiRNAなどのアクセスを遮断してCCN2発現を増強するという可能性は低くなった。そこで次にACURがCCN2遺伝子座周辺の微細環境の形成に貢献していることを想定し、予備実験を開始した。
3. UCA1の作用メカニズムの解明:昨年度の研究でUCA1の作用が軟骨細胞特異的であることが明らかになったが、本年度はヒト線維芽細胞にUCA1を強制発現させ、RNA-sequencingを行ったデータを公共データベースからダウンロードし再解析した。その結果、線維芽細胞でUCA1はCCN2発現に影響を与えないという結果が得られた。したがってUCA1によるCCN2発現制御は軟骨細胞形質の変化に伴う間接的な現象と考えられる。
4. CCN2遺伝子座から出力される新たなRNA分子の発見:CCN2 pre-mRNAから生成しうる環状RNA (circRNA)を探索したところ、ヒトとマウスにおいて今までに報告のないcircRNAが複数出力されていることを見出した。
- ID情報
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- 課題番号 : 21H03105
- 体系的課題番号 : JP21H03105
この研究課題の成果一覧
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MISC
13-
第13回日本CCNファミリー研究会 2022年9月
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日本軟骨代謝学会プログラム・抄録集 34th 2022年
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第44回日本分子生物学会年会横浜(ハイブリッド開催)(口演)(P)[3P-0622] 44th 2021年12月
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第94回日本生化学会大会, 横浜(Web開催)(口演)(P)[P-715(1T13e-09)] 94th [1T13e-715)] 2021年11月
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第42回岡山歯学会,岡山 (Web開催) (O) 40(2) 38-39 2021年11月
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第12回日本CCNファミリー研究会, 岡山(Web開催)(口演) 2021年9月
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日本口腔科学会雑誌 70(2) 134-134 2021年7月
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岡山歯学会雑誌 39(2) 36-36 2020年12月
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日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 43rd(2) 134-134 2020年12月
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日本生化学会大会(Web) 92nd [2T12m-06] 2019年9月
講演・口頭発表等
8-
第45回日本分子生物学会 日本生物物理学会 共催 2022年12月2日
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第13回日本CCNファミリー研究会 2022年9月3日
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第42回岡山歯学会 2021年11月28日
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日本口腔科学会雑誌 2021年7月 (NPO)日本口腔科学会
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岡山歯学会雑誌 2020年12月 岡山歯学会
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日本生化学会大会プログラム・講演要旨集 2019年9月 (公社)日本生化学会
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日本生化学会大会(Web) 2019年9月 (公社)日本生化学会
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日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 2018年11月