まず、胆道の正常と腫瘍オルガノイド（KRAS/TP53変異）、それらの培養上清、培養上清から回収した細胞外小胞（EV）の計6種のサンプルに対して、microRNAやタンパク質の網羅的解析を行った。これら結果の比較により、今年度は腫瘍オルガノイドで有意に発現低下のみられたmiR-Aに着目し、このmiR-Aの胆道癌における意義や診断、治療標的としての可能性について検討した。1）胆嚢癌細胞株3種を用いたin vitroの実験で、miR-Aの過剰発現により、細胞増殖能や遊走能を抑制し、アポトーシスを誘導することが明らかとなった。2）細胞株のスフェロイド培養でも同様の増殖抑制効果が確認された。3）その標的遺伝子として、抗アポトーシス物質であるSurvivinが関与していることが明らかとなった。さらにオートファジー関連遺伝子の制御によるオートファジー阻害にも関与している可能性が示唆され、検討を行っていく。4）In vivo実験にて、miR-Aの局所投与により、抗腫瘍効果を認め、治療に応用できる可能性が示唆された。さらに、診断への応用も含め、検討していく。一方、EV中のタンパク質発現の比較にて、正常、腫瘍オルガノイド由来EVから、それぞれ156個、155個（共通152個）のタンパク質が同定された。EVマーカーである、CD9、CD63、CD81、TSG101も同定されており、サンプルの質は良好と考えられた。今後、腫瘍由来EVで高発現していたタンパク質に注目し、臨床検体での腫瘍マーカーとしての有用性を検討していく。