2019年度の計画である「卵巣癌患者腹水中のエクソソーム内在miR574-3P定量ならびに、患者の臨床情報と関連した解析を行い腫瘍マーカーおよび予後・予知因子となる可能性を明らかにする。」に基づき卵巣癌患者由来の腹水からのエクソソームの回収条件および内在するmiRNA抽出条件の検討を行った。まず使用サンプル量の検討として、10mL、5mLの腹水サンプルを用い、Exo Easy Maxi kit（QIAGEN）を使用して細胞外小胞を回収した後、NanoSighatシステム(日本カンタムデザイン)による粒子径および粒子濃度を解析した。回収した小胞はエクソソームタンパク質マーカーであるCD63、CD9抗体を用いたウエスタンブロットによる評価を行い、エクソソームであることを確認した。次にエクソソーム内在miRNAの抽出試薬の検討を行った。方法としては回収したエクソソームは既存のキット試薬2種①グアニジンイソチオシアネート・βメルカプトエタノール液および②グアニジンイソチオシアネート・フェノール、クロロホルムを用い、exosome RNeasy Micro kit（QIAGEN）による内在miRNAの抽出を行った。さらに、抽出したmiRNAの量・質の評価にはバイオアナライザー(Agilent)を用いて行った。その結果、解析に用いるサンプル量については10mL、5mLいずれも直径100-300nmの小胞が検出されたが10mLサンプルを用いた方が直径100nm程度のエクソソームと思われる小胞が効率よく回収されていることを確認した。また、miRNAの抽出液の検討ではグアニジンイソチオシアネート・βメルカプトエタノール液を用いた方がmiRNAの回収率が良いことが確認された。本検討の結果より腹水由来エクソソームの回収条件および内在するmiRNA抽出条件が確立された。