本研究では，鳥類におけるゲノム編集技術を確立することを目的に，鳥類の雄化に関わるHEMGEN遺伝子を標的に人工ヌクレアーゼ（TALEN）を作製し，ニワトリ多能性幹細胞や生殖系列細胞からHEMGENノックアウトニワトリを作出し，その表現型により本技術導入の可否を判断するものである。平成25年度は，HEMGEN遺伝子を標的したTALENを設計・構築し，SSAアッセイによる二重鎖切断（DSB）活性の測定，GFP発現ベクターを用いたTALEN発現ベクターの導入条件の検討，ニワトリ胚性幹（ES）細胞へのTALEN発現ベクターの導入とCel-1アッセイ，変異導入領域の塩基配列の解析を行なった。HEMGENノックアウト用TALEN発現ベクターは３種作製し，SSAアッセイを用いて評価した。その結果，構築した２種の発現ベクターで標準活性の約２倍のDSB活性が認められた。次に，GFP発現ベクターを用いて，ニワトリES細胞やニワトリエピブラスト幹細胞（epiSC）にTALEN発現ベクターを導入する際のエレクトロポレーターの条