2012年9月
マルトースホスホリラーゼを用いた分岐グルコ3糖の生産
新潟大学農学部研究報告
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- 巻
- 65
- 号
- 1
- 開始ページ
- 67
- 終了ページ
- 75
- 記述言語
- 英語
- 掲載種別
- 出版者・発行元
- 新潟大学農学部
We discovered an inverting maltose phosphorylase (Bsel2056) belonging to glycoside hydrolase family 65 from Bacillus selenitireducens MLS10, which possesses synthetic ability for α-D-glucosyl disaccharides and trisaccharides through the reverse phosphorolysis with β-D-glucose 1-phosphate as the donor. Bsel2056 showed the preference for monosaccharide acceptors with alternative C2 substituent (2-amino-2-deoxy-D-glucose, 2-deoxy-D-arabino-hexose, 2-acetamido-2-deoxy-D-glucose, D-mannose), resulting in production of 1,4-α-D-glucosyl disaccharides with strict regioselectivity. In addition, Bsel2056 synthesized two maltose derivatives possessing additional D-glucosyl residue bound to C2 position of the D-glucose residue at the reducing end, 1,4-α-D-glucopyranosyl-[1,2-α-D-glucopyranosyl]-D-glucose and 1,4-α-D-glucopyranosyl-[1,2-β-D-glucopyranosyl]-D-glucose, from 1,2-α-D-glucopyranosyl-D-glucose (kojibiose) and 1,2-β-D-glucopyranosyl-D-glucose (sophorose), respectively, as the acceptors. Modeling structure analysis using Lactobacillus brevis GH65 maltose phosphorylase as the template and superimposition of an inhibitory pseudomaltotetrasacchaide acarbose from a complex with Aspergillus awamori GH15 glucoamylase suggested that Bsel2056 possessed a binding space to accommodate the bulky C2 substituent of D-glucose.糖質加リン酸分解酵素(ホスホリラーゼ)は、その反応の可逆性と厳密な反応位置特異性からオリゴ糖合成に利用可能である。しかし既知のホスホリラーゼは16種類のみ報告されており、新たな特異性を有するホスホリラーゼの発見が望まれている。そこで今回Bacillus selenitireducens MLS10が有するGlycoside Hydrolase Family 65に属するマルトースホスホリラーゼ遺伝子(bsel2056)をクローニングし、組換え酵素の糖受容体特異性を調査した。結果、グルコースの2位にアミノ基を有するグルコサミンなど8種の単糖類を糖受容体とし、α-1,4- グルコ2糖を生産することが明らかになった。さらに既知のマルトースホスホリラーゼとは異なり、本酵素は1、2結合を有するグルコ2糖すなわちコウジビオースおよびソフォロースを糖受容体として認識し、分岐グルコ3糖を生産した。また3D モデリング解析の結果から、糖受容体として結合するグルコースの2位の水酸基周辺に本酵素特有の嵩高い置換基(アミノ基やグルコース残基)を収納するための結合スペースが認められた。
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- ID情報
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- ISSN : 0385-8634
- CiNii Articles ID : 120005285480
- CiNii Books ID : AN00183393