Apr, 2020 - Mar, 2023
乾癬病変部表皮角化細胞産生EBI3含有サイトカインに関する研究
日本学術振興会 科学研究費助成事業 基盤研究(C) 基盤研究(C)
- Grant number
- 20K08672
- Japan Grant Number (JGN)
- JP20K08672
- Grant amount
-
- (Total)
- 4,290,000 Japanese Yen
- (Direct funding)
- 3,300,000 Japanese Yen
- (Indirect funding)
- 990,000 Japanese Yen
乾癬患者皮膚病変部、あるいは皮膚腫瘍手術標本断端のパラフィンブロック標本を用いて、EBI3の発現を免疫染色法によって検討したところ、EBI3は乾癬病変部の表皮にて全層性に高発現していることが確認された。
培養ヒト正常表皮角化細胞を炎症性サイトカイン(TNF-alpha+IFN-gamma+IL-17A、いずれも50ng/ml)で24~96時間刺激後、培養上清を遠心式限外ろ過フィルターにて25~80倍濃縮し、一次抗体(抗EBI3抗体)と4℃一晩インキュベート。Protein Aアガロースビーズ処理後、PBSで洗浄し、0.1mol/l グリシン-塩酸緩衝液 (pH2.2) で懸濁し、結合蛋白質を溶出。その後トリプシン消化(Trypsin、37℃、一晩)し、nano LC-MS/MSによる受託プロテオーム解析を施行したところ、EBI3蛋白を検出することが出来たが、p19、p28、p35は検出されなかった。これらの結果からは表皮角化細胞がIL-27、IL-35、IL-39を産生しているとは考えにくく、EBI3モノマー・ホモダイマー・ホモトリマーあるいは未知のヘテロダイマーなどを産生している可能性が示唆された。
以上の結果をInternational Journal of Molecular Sciences誌に報告した。
培養ヒト正常表皮角化細胞を炎症性サイトカイン(TNF-alpha+IFN-gamma+IL-17A、いずれも50ng/ml)で24~96時間刺激後、培養上清を遠心式限外ろ過フィルターにて25~80倍濃縮し、一次抗体(抗EBI3抗体)と4℃一晩インキュベート。Protein Aアガロースビーズ処理後、PBSで洗浄し、0.1mol/l グリシン-塩酸緩衝液 (pH2.2) で懸濁し、結合蛋白質を溶出。その後トリプシン消化(Trypsin、37℃、一晩)し、nano LC-MS/MSによる受託プロテオーム解析を施行したところ、EBI3蛋白を検出することが出来たが、p19、p28、p35は検出されなかった。これらの結果からは表皮角化細胞がIL-27、IL-35、IL-39を産生しているとは考えにくく、EBI3モノマー・ホモダイマー・ホモトリマーあるいは未知のヘテロダイマーなどを産生している可能性が示唆された。
以上の結果をInternational Journal of Molecular Sciences誌に報告した。
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- ID information
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- Grant number : 20K08672
- Japan Grant Number (JGN) : JP20K08672